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本试剂盒可测各种动物血清（浆）、组织、细胞、培养液等样本中脂肪酶活性。


甘油三脂和水制成的乳胶，因其胶束对入射光的吸收及散射而具有乳浊性状。胶束中的甘油三脂在脂肪酶（Lipase；LPS）的作用下发生水解，使胶束分裂，散射光或浊度因而减低，减低的速率与脂肪酶活力有关。


人体脂肪酶主要来源于胰腺。血清LPS得到增高常见于急性胰腺炎及胰腺癌，偶见于慢性胰腺炎。急性胰腺炎时血清淀粉酶增高时间较短，而血清LPS的升高可持续10～15天。腮腺炎时，LPS通常在正常范围，因而LPS对急性胰腺炎的研究更具有特异性。脂肪酶基本组成单位仅为氨基酸，通常只有一条多肽链。它的催化活性仅仅决定于它的蛋白质结构。脂肪酶是分解脂肪的酶，测定血清脂肪酶主要用于对急性胰腺炎的研究。甘油三脂和水制成的乳胶，因其胶束对入射光的吸收及散射而具有乳浊性状。底物在脂肪酶作用下发生水解，使胶束分裂，散射光或浊度因而减低，减低的速率与脂及酶活力有关。

• 快速简便：速率法，20分钟可完成20-40例样本的测定。
  
• 取样量微：取样量仅为50l左右
  
• 稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
  
• 再现性好：变异系数CV=1.7%。
  
• 回收试验：X =102%。
  
• 受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
  
• 测试面广：可测各种动物血清（浆）、组织等。

组分	规格
试剂一：底物缓冲液	2×60mL
试剂二：Tris缓冲液	10mL
试剂三：生理盐水	10mL
试剂四	10mL

保存：4℃，有效期6个月。

• 可见分光光度计（比色测定波长为420nm）
  
• 恒温水浴箱或气浴箱（孵育温度为37℃）
  
• 漩涡混匀器
  
• 微量移液器

• 比色皿每次比色前要用温蒸馏水洗涤干净后在进行下次比色。
  
• 约有3～5%分析标本与底物作用后吸光度反而增加，一般是反复冻融的标本及IgM增高的样本(如类风湿因子)。

一、血清(浆)脂肪酶的测定

• 操作过程：
  
  • 将分光光度计于420nm处，1cm光径玻璃比色皿，用Tris缓冲液调零。
    
  • 将底物缓冲液37℃预温5分钟以上。
    
  • 往相应编号的试管中加入50μL新鲜血清（浆），吸取已预温好的底物缓冲液2mL冲入试管中，快速混匀，并计时。
    
  • 迅速倒入比色皿中，在分光光度计420nm处比浊，30秒时读取吸光度值A₁。
    
  • 将此比色液倒入原试管中置37℃准确水浴10分钟，再迅速倒入比色皿中，10分30秒时读取吸光度值A₂。
    
  • 求出2次吸光度差值(△A＝A₁－A₂)。
• 计算：
  
  • 血清(浆)脂肪酶单位定义：
    在37℃条件下，每升血清（浆）在本反应体系中与底物反应1分钟，每消耗1μmol底物为一个酶活力单位。
    
  • 标准管吸光度的计算：
    取底物缓冲液2mL加生理盐水50μL，420nm处比浊，读取吸光度值A_S值，此A_S值相当于标准管（454μmol/L）的浓度的吸光度值。
    
  • 计算公式：
    

    血清(浆)LPS 活力(U/L)	＝	A1—A2	×C标准×	V反总	÷T
    		AS		V样

    
    C_标准：标准浓度，454μmol/L；
    V_反总：反应液总体积，2.05mL；
    V_样：样本取样量，0.05mL；
    T：反应时间，10分钟。
• 举例：
  取猪血清0.05mL按步骤操作后测得A_S为0.729，A₁为0.916，A₂为0.891，则该猪血清LPS活力为：
  

  猪血清LPS 活力(U/L)	＝	0.916—0.891	×454×	2.05	÷10
  		0.729		0.05
  	＝	63.834U/L

二、组织脂肪酶的测定

• 操作过程：
  
  • 将分光光度计于420nm处，1cm光径玻璃比色皿，用Tris缓冲液调零；
    
  • 将底物缓冲液37℃预温5分钟以上；
    
  • 往相应编号的试管中加入25μL 20％的组织匀浆上清液，再加入试剂四25μL，吸取已预温好的底物缓冲液2mL冲入试管中，快速混匀，并计时；
    
  • 迅速倒入比色皿中，在分光光度计420nm处比浊，30秒时读取吸光度值A₁；
    
  • 将此比色液倒入原试管中置37℃准确水浴10分钟，再迅速倒入比色皿中，10分30秒时读取吸光度值A₂；
    
  • 求出2次吸光度差值(△A＝A₁－A₂)。
• 计算：
  
  • 组织脂肪酶的单位定义：
    在37℃条件下，每克组织蛋白在本反应体系中与底物反应1分钟，每消耗1μmol底物为一个酶活力单位。
    
  • 标准管吸光度的计算：取底物缓冲液2mL加生理盐水50μL，420nm处比浊，读取吸光度值A_S值，此A_S值相当于标准管（454μmol/L）的浓度的吸光度值。
    
  • 计算公式：
    

    组织LPS活力 (U/gprot)	＝	A1—A2	×C标准×	V反总	÷T÷Cpr
    		AS		V样

    
    C_标准：标准浓度，454μmol/L；
    V_反总：反应液总体积，2.05mL；
    V_样：样本取样量，0.05mL；
    T：反应时间，10分钟；
    Cpr：组织匀浆蛋白浓度，gprot/L(prot指蛋白)。
• 说明：
  
  • 20%组织匀浆的制备：
    准确称取组织湿重，按重量(g)∶体积(mL)＝1∶4的比例，加入4倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，取上清液进行测定。
    
  • 胰腺中脂肪酶含量很高，测定之前需做预实验以确定最佳取样浓度(△A≤0.4)。
• 举例：
  取20%肝胰腺匀浆0.025mL按步骤操作后测得A_S为0.716，A₁为1.068，A₂为0.989，同时测得该20%肝胰腺匀浆液蛋白浓度为15.346gprot/L，则该样本LPS活力为：
  

  组织LPS活力 (U/gprot)	＝	1.068—0.989	×454×	205	÷T÷15.346
  		0.716		0.025
  	＝	26.732U/gprot

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